1.冷凍真空干燥(vacuo-lyophilization)滅菌
冷凍：－20℃以下，細胞原生質內水分結冰，破壞其膠體狀態并機械擠壓，刺傷菌體而死亡。
真空：抽去空氣呈低氧或絕氧狀態，抑制正常呼吸
干燥：導致菌體脫水和鹽類濃度增高，抑制代謝活動正常進行
2.微波(microwave)滅菌
微波：是頻率范圍為300~300000MHz的無線電波，與其他波段的無線電波相比，其具有波長短，振蕩周期短，似光波性和頻率很高等特點。
微波滅菌機理：微波的熱效率高；介質分子振蕩旋轉速度快；菌體脫水，蛋白質凝固；染色體、細胞膜、酶系統發生變性。
3.γ射線(γ-ray radiation)滅菌
γ射線：是一種波長非常短能量非常大，有強烈穿透力使物質產生電離作用的電磁波。
γ射線滅菌機理：低劑量的γ射線誘發生物變異。高劑量γ射線使水分子電離，生成具有強氧化性的H+和強還原性的OH－，直接作用菌體細胞本身；電離產生的電子和環境的分子氧結合，氧化菌體內酶的化學基團使酶失活；輻射能導致DNA降解或其他物質分解，造成死亡。
4.化學熏蒸（fumigating）滅菌法
化學熏蒸的概念：在一定溫度和壓力的密閉條件下，化學毒劑由固態或液態迅速轉成氣態滲透到生物體內，使生物致死。
常用熏蒸滅菌劑
(1)甲醛（HCHO）
R—NH2 + HCHO R—NH2 •CH2O
甲醛的滅菌機理在于它的還原作用與蛋白質的氨基結合使其變性，從而破壞了酶系統和細胞膜、細胞壁的結構
(2)環氧乙烷(CH2OCH2)
R—SH + CH2OCH2 R—S—CH2CH2OH
環氧乙烷的滅菌機理在于它與蛋白質的氨基、羥基、酚基和巰基結合使其變性，抑制氧化酶和脫氫酶的活性，破壞菌體正常代謝